限定化學(xué)成分培養(yǎng)基是指培養(yǎng)基中的素有成分都是明確的,它同樣不含有動物蛋白,化學(xué)限定培養(yǎng)基同樣也不是添加了植物水解物,而是使用了一些已知結(jié)構(gòu)與功能的小分子化合物,如短肽、植物激素等.這種培養(yǎng)基更有利于分析細胞的分泌產(chǎn)物.目前已經(jīng)有適合于293細胞、CHO細胞、雜交瘤細胞生長的CDM問世。
一、常規(guī)培養(yǎng)和傳代
1）在聚碳酸酯Erlenmeyer搖瓶中預(yù)平衡足量化學(xué)限定培養(yǎng)基1小時。
2）確定活細胞密度。
3）調(diào)整搖瓶工作體積（見英文說明書表2）。
4）接種細胞密度為3×105細胞/ml
5）5%CO2，37℃培養(yǎng)。
6）細胞密度達到15-40×105細胞/ml時，進行傳代。通常間隔為3-4天。
7）如果細胞密度太低，或細胞在適應(yīng)期不生長，則在4天后進行離心，更換培養(yǎng)基。
對某些細胞系，無須預(yù)平衡，而2-8℃的培養(yǎng)液效果更好。
二、從血清到無血清培養(yǎng)的過渡
1.離心足量細胞，細胞懸液密度為4-6×105細胞/mL，115×g，5分鐘
2.細胞在含2%胎牛血清的培養(yǎng)基中重懸培養(yǎng)（必要時含6-8mM谷氨酰胺）。
3.細胞每2-4天傳代或更換培養(yǎng)液。
4.在傳代至少3次后降低血清濃度為0.5%。
5.細胞每2-4天傳代或更換培養(yǎng)液。
6.在2-4代后血清濃度降為0%
7.繼續(xù)培養(yǎng)直到細胞存活率＞90%
8.適應(yīng)后的細胞應(yīng)在化學(xué)限定培養(yǎng)基中以2-5×105細胞/ml接種。培養(yǎng)的細胞應(yīng)在每3-4天稀釋一次。由于HEK細胞容易積聚，培養(yǎng)物應(yīng)攪動或搖晃，采用轉(zhuǎn)瓶或搖瓶系統(tǒng)。
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